抗病毒剂生物测定

用药剂处理已接种病毒或已感染病毒的植物，测定植物组织中病毒含量，或根据植物发病情况判定抗病毒剂药效的杀菌剂生物测定。

方法

按施药方式不同，抗病毒剂生物测定方法有浸渍法、组织培养法、涂茎法、撒布法和土壤施药法五种：

浸渍法

将已感染病毒的植物组织（叶片）放于一定浓度的药液表面，一定时间后根据叶片中病毒含量不同来比较药剂效果的方法。例如从温室中培育的寄主植物上切取健全的叶片，在叶面上用摩擦接种法接种患有病毒病的叶片汁液或纯化的病毒稀释液，叶片干燥后，用打孔器从叶肉部分打取直径10～12毫米的圆形叶片。再将此小叶片放入盛有一定浓度药液的培养皿中，每皿10～12片，叶片必须浮于药液表面。也可在培养皿中铺放经药液湿润的滤纸，叶片摆在滤纸上面。然后在25℃恒温箱中，并在荧光灯照射下培养若干天。*后从处理组和对照组各取10片叶片，水洗后测定这些叶片中的病毒含量。用各处理组和对照组之比值来表示其药效。另外，根据试验目的不同，也可采用先行药剂处理，后接种病毒的方法。

组织培养法

将已感染病毒的幼嫩植物组织，在混有药剂的培养基中培养一定时间后，测定病毒含量，比较药效的方法。一般用幼嫩植物的茎或根作试材。①用茎时，可在盆栽烟草幼苗上接种病毒，将已感染病毒的上部节间用1.5%过氧化氢消毒1分钟，然后切取长2～3毫米的茎段。再将其放到混有定量药剂的培养基上，在21℃下培养7～10天后，在茎段上会出现白色伤愈组织，经20～25天后，取出此茎段，测其重量，并将茎段冻结，测定其中病毒含量。②用根作试材时，在灭菌和培养皿中注入灭菌的2～3%洋菜液，将消毒后的番茄种子摆在皿内，使其发芽；当根生长到2～3厘米时取出，移入放有特定培养液中培养；之后，再将其移入掺有少量石英砂的病毒液中进行振荡，接种病毒，*后移到无毒培养液中培养。产生侧根后取其一部分测定其病毒含量。另一部分在新的培养液中继续培养一定时间后也测定病毒含量。根据试验目的，在适当时候将药剂加入培养液中，根据对照组和处理组病毒含量的不同来测定药效。

涂茎法

在已感染病毒的植物幼茎部，涂上一定量的药剂，根据产生的病斑数和病斑大小来比较药效的方法。如用菜豆作试材，可将盆钵播种的菜豆在温室内培育到初生叶全部展开、次生叶开始出现时，在叶的下部胚轴上选三个点作为接种点，每点间隔5毫米，于各点上接种0.5毫升南方菜豆花叶病毒（SBMV）接种源，并在各接种的液滴处加1毫升金刚砂，用尖头细玻璃棒轻轻摩擦5～6次。接种后用水洗去金刚砂和过剩的接种源。4～5天后可出现暗褐色塌陷病斑。测定用的药剂用羊毛脂配成1%膏状，保持在50℃以下。待接种和水洗部位干燥后，立即以直径5～7毫米的棉球蘸取药剂，在接种部位涂上一层药膏。以只涂羊毛脂（不含药剂）的处理为对照，计算对照组和处理组产生的病斑数和病斑大小，以比较药效。

撒布法

将药剂撒布在盆栽植物上测定药效的方法。在盆栽植物上撒布所测药剂，可在施药前或施药后的适当时候接种病毒，一定时间后观察病症程度和病症出现的时间长短，或测定植物体内病毒含量，以判断药效。

土壤施药法

将药剂施入土壤，测定幼苗病毒含量的方法。测定防治土传病毒的药剂时，把带病土壤装入钵内，再将药剂溶解后灌入土中，或把药剂用填充料（滑石粉、砂等）稀释后混入土壤中，然后播种种子，一定时间后观察幼苗病症和病症出现时间或测定幼苗中的病毒含量。

病毒定量

上述抗病毒剂生物测定方法中，病毒含量常用生物定量法测出。如局部病斑计数法：是以局部植物组织产生病斑数与接种的病毒浓度成正比关系来测定病毒含量的方法。此法*早是将烟草花叶病毒（TMV）接种到烟草叶片上，发现叶片上的病斑数与接种病毒的浓度成正比，因此就将这种方法用于病毒的定量。但须采用容易计数病斑的寄主植物为试材，常用的组合有烟草花叶病毒与烟草，黄瓜花叶病毒与豇豆，萝卜花叶病毒与烟草等。此法，**要求培育生长状况均一的无毒植物，如用烟草时，可在直径12厘米的花盆内种植1株，用豇豆时则种植2株。当烟草本叶完全展开4～5片或豇豆的初生叶全部展开、复叶开始伸长时，用来测定为宜。为使病毒对植物有更高的感染率，应注意被测植物的水肥管理，以培育出营养状况较好、青绿而柔软的植株。测定病毒含量时，烟草用半叶法，豇豆用对叶法。①半叶法：以叶片的一半为对照，另一半为处理的病毒定量方法。即以叶脉为界，其中一半叶接种药剂处理的病毒汁液，另一半叶接种无药剂处理（对照）的病毒汁液。3～4天或数日后即出现病斑，当病斑出现到容易计数时，计算处理组和对照组病斑数，并计算病毒增殖抑制率。以此比较各处理间的药效。②对叶法：以对生叶的一片叶为对照，另一片叶为处理，测定药效和病毒含量的方法。具体方法和半叶法一样。在上述两种方法的病毒定量时，每一处理要用20～30片叶，接种量以一半叶片或一对生叶片产生15～40个病斑为宜。因此，用缓冲液稀释病毒接种源时要掌握好用量。