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狂犬病免疫反应的检测（3）（WHO专题文献选译）

狂犬病免疫反应的检测（3）（WHO专题文献选译）

说明：

2011年2月，WHO正式发布了《疫苗接种的免疫学基础系列，第17分册：狂犬病(The Immunological Basis　for Immunization Series，Module 17: Rabies)》。此文献深入浅出地讲解了与狂犬病相关的免疫学基本知识，回答了人们普遍关心的许多理论问题和实践问题。本博客当年曾全文翻译了此文献。

WHO于2017年对此文献进行了修订，更新了大量内容，可增进我们对狂犬病相关免疫学知识的系统认识和深入理解。本博客近期将陆续选择该更新版的较重要的内容进行介绍。

本次介绍该文献的第4章：

4.狂犬病免疫反应的检测

本章目录

4.1依据目的选择检测方法

4.2检测病毒中和活性（RFFIT、FAVN、MNT）

4.3 结合实验（ELISA）

4.4 检测细胞免疫反应

4.3 结合实验（Binding assays）（ELISA）

酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前使用*频繁的结合试验，有许多已公布的方案和专业销售的酶联免疫吸附试验试剂盒可用于检测狂犬病毒抗体。ELISA的特异性取决于检测所用的目标抗原-全病毒或纯化病毒蛋白的选择。ELISA检测到的抗体不一定具有中和功能。已发表的报告表明，在使用全病毒而不是纯化G蛋白作为目标抗原的ELISA检测中，可能会增加交叉反应，可能导致假阳性。已经发表的几项研究比较了用各种ELISA技术和RFFIT(快速荧光灶抑制试验）或FAVN（荧光抗体病毒中和试验）检测的血清样本的结果，结果是复杂的。

因此，在ELISA检测中采用0.5 IU/mL的血清转化阈值（threshold for seroconversion）是不合适的，除非该技术已被证明与血清中和产生等效的结果。具有较高特异性的ELISA试剂盒，如那些使用G蛋白作为抗原的试剂盒，已被报道与RFFIT和FAVN有更好的相关性。在确定截止水平（cut-off levels）和解释操作指南之前，充分评估在代表体液反应动力学的样本中ELISA测量的中和抗体水平和结合抗体水平的相关性是很重要的。例如,一项比较人类临床试验中RFFIT结果与ELISA结果的研究表明,在这两种检测中，为获得疫苗比较的相同结论而使用相同的截止水平是困难的——即ELISA测量的反应较晚才达到峰值,因此在与RFFIT结果相比较时显得较低。

*近,一种阻断ELISA（blocking ELISA）试剂盒被证明对口服食饵疫苗方案的监测很有用;对359只狐狸和浣熊狗（raccoon dog）血清样本的分析采用了ELISA和FAVN测试,并观察到95%的一致性。该阻断ELISA被确定比间接ELISA更敏感,并确定能有效地测定已溶血血清中的狂犬病毒抗体。

一种竞争ELISA测定（competitive ELISA assay）使用一种细胞系表达的狂犬病毒G蛋白作为抗原，用两种标记的单克隆VNA（狂犬病毒中和抗体）作为竞争抗体，检测4,350份犬类样品的VNA，并与使用FAVN进行检测的结果进行比较研究,结果表明,没有假阳性或假阴性，两者的血清学滴度之间的相关性达到96.2%。该项测试的血清样本中其余3.8%的样品的滴度在用这两种方法进行检测时都超过8.0 IU / mL的水平,而用这两种检测方法所获得的血清学滴定的结果在高滴度水平时则都波动更大。特别是与复杂的手工方法相比，ELISA试剂盒能够提供简单的试剂/物料控制和良好的重复性，前提是注意两个关键因素：可接受的批间质量控制和严格遵守制造商的测试操作指南。

参考文献：

World Health Organization.(‎2017)‎.The immunological basis for immunization series: module 17: rabies.World HealthOrganization.https://apps.who.int/iris/handle/10665/259511. License: CC BY-NC-SA 3.0 IGO